登革熱IgM抗體檢測作業指導書
1. 目的
根據國家標準ws216-2008，規范本中心登革熱IgM抗體的檢測。
2. 適用范圍
2.1 適用于血清或血漿中登革熱IgM抗體的檢測。
3. 職責
檢測人員：負責按照本檢測細則對被測樣品進行檢測。
復核人員：負責對檢測操作是否規范以及檢測結果是否準確進行復核。
科室負責人：負責對檢測操作的監督和檢測結果的審核。
4. 規程：親和素-生物素法檢測登革熱IgM抗體。
4.1 原理：在微孔條上包被生物素化抗原，配以酶標記抗人IgM單克隆抗體作為標記抗原及TMB顯色劑等其它試劑，采用親和素-生物素法檢測登革熱IgM抗體。
4.2 試劑
4.2.1 生物素化抗原預包被板
4.2.2 陰性、陽性對照
4.2.3 酶結合物
4.2.4 30X濃縮洗滌液。（用蒸餾水1：30稀釋使用）
4.2.5 顯色劑A、B液。
4.2.6 終止液。
4.2.7 封片。
4.3 儀器與設備
4.3.1 20-200μL可調移液器。
4.3.2 電熱恒溫水溫箱。
4.3.3 微量振蕩器。
4.3.4 洗板機、酶標儀。
4.4 操作步驟
參照試劑盒說明書或按以下步驟操作。
4.4.1 將試劑盒平衡至室溫后取出反應板拆封。
4.4.2 加樣：將待檢標本用標本稀釋液1：41稀釋（5ul-200ul）,于反應板中加稀釋好的待檢標本及陰陽對照各100ul/孔，設空白對照一孔（不加任何液體），輕輕混勻。37℃溫育30分鐘。
4.4.3 甩去孔內液體，用洗滌液洗板3次并拍干。
4.4.4 加酶結合物：每孔2滴，混勻后置37℃溫育30分鐘。
4.4.5 同4.4.3步驟。
4.4.6 顯色：每孔加顯色劑A、B各一滴，用震蕩器混勻，后置37℃溫育10分鐘
4.4.7 用酶標儀讀數，取波長450nm，先用空白孔校零，然后讀取各孔OD值。
4.4.8 結果判斷
4.4.8.1 P/N=標本OD值/陰性對照OD值
4.4.8.2 P/N≥2.1為陽性；
4.4.8.3 1.5≤P/N<2.1 為可疑標本；P/N<1.5為陰性。
4.4.8.4 陰性對照（NC）小于0.10時以0.10計，大于0.1小于0.21時以實際OD值計算；若大于0.21時，實驗可能出現了較大誤差，需重復實驗。
4.4.8.5 陽性對照（PC）值≥0.4，實驗成立，否則需重做。
4.6 注意事項
4.6.1 從冷藏環境中取出的試劑盒內全部瓶裝試劑及待測標本所需微孔反應條應置37℃平衡30分鐘后方可使用，余者應及時封存于冰箱中以備后用。在平衡試劑的同時，待測標本需置室溫平衡30分鐘后再行測試。
4.6.2 使用前試劑應搖勻，并棄去1～2滴后垂直滴加。
4.6.3 封片不能重復使用。
4.6.4 結果判斷須在反應終止后10分鐘內完成。
4.6.5 不同批號的試劑不可混用。
4.6.6 待測標本不可用NaN3防腐，如需稀釋標本，請用小牛血清稀釋。
4.6.7 洗滌時每孔均須加滿，防止孔內有游離酶不能洗凈。
4.6.8 避免用溶血、混濁或脂血標本。
廣州健侖生物科技有限公司
2005/05/06
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