肺炎衣原體IgM 檢測試劑盒
肺炎衣原體IgM 檢測試劑盒(酶聯免疫法)
1、 前言說明
衣原體是一種不能運動的革蘭氏陽性菌，同時也是一種強制性的胞內寄生菌，而且這種細菌可在其寄主細胞的胞漿內形成明 顯的包涵體。這種包涵體在光學顯微鏡下很容易看到。目前人們知道有三種不同的衣原體對人具有至病性，它們是：沙眼衣原體、肺炎衣原體和鸚鵡衣原體，還有一 種對動物具有至病性的衣原體（獸類衣原體）。沙眼衣原體是世界上性傳播疾病最流行的傳播因子（4000-5000萬例），并且此傳染病的數量還在不斷增 加。感染了沙眼衣原體的孕婦可以在分娩時將病毒傳染給胎兒，從而導致胎兒患結膜炎或肺炎。 衣原體感染不治療的個體會導致慢性輸卵管炎，并且很有可能出現宮外孕或不孕。在男性中，沙眼衣原體是導致非淋球菌性尿道炎的主要因素。在衣原體感染中，頻 繁性的無癥狀隱性階段是一個很嚴重的問題，因為它可能啟動慢性疾病。在許多例子中，原發性感染都沒有被發現，之后只能檢測到由持續上升病原體而引起的后遺 癥。
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種類 |
感染機制 |
疾病 |
診斷方法 |
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沙眼衣原體 |
直接傳播或性傳播：主要感染部位是眼或泌尿生殖道黏膜 |
淋巴性肉芽腫，沙眼，新生兒或成年包涵體性結膜炎，宮頸炎、輸卵管炎、尿道炎、附睪炎、直腸炎及新生兒肺炎。 |
血清學 |
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肺炎衣原體 |
呼吸道黏膜浸潤 |
呼吸道疾病 有爭議的疾病：心內膜炎，冠心病 心臟病 |
PCR |
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鸚鵡衣原體 |
吸入受染禽類的糞便；接觸了受染禽類的內臟。 |
飼鳥病（鸚鵡熱） |
鏡檢 |
可通過以下方法來檢測是否感染：
n 鏡檢：Giemsa染色
n PCR
n 血清學：用ELISA檢測抗原
用IF、EIA或ELISA檢測抗體
2、應用范圍
IBL公司的肺炎衣原體IgM ELISA試劑盒可用于人血清中抗肺炎衣原體IgM抗體的定性檢測。
3、實驗原理
抗肺炎衣原體IgM抗體的定性免疫酶檢測利用的是ELISA技術。包被板上預先包被了能結合樣本中相關抗體的肺炎衣 原體抗原。洗板以除去未結合的樣品物質，之后加入辣根過氧酶標記的抗人IgM。之后，酶標物會結合到捕獲的肺炎衣原體特異性抗體上，加入能產生藍色反應產 物的TMB底物液后，如果顯示藍色則可知已形成免疫復合物。所顯示顏色的強度與樣品中肺炎衣原體特異性IgM抗體的量成正比。加入硫酸以終止反應,以便產 生黃色的終點顏色。用一酶標儀在450m處讀取OD值。
4、材料
4.1試劑盒成分
1) 肺炎衣原體包被板（IgM）：12×8，可拆，微孔中包被了肺炎衣原體抗原，真空密封。
2) IgM樣本稀釋液：1瓶，100ml，用于樣品的稀釋，內含抗人IgG，PH為7.2±0.2，即用，綠色白蓋。
3) 終止液：待用硫酸，1 瓶，15ml，內含硫酸，0.2mol/l，紅蓋。
4) 濃縮洗滌液（20X）：1瓶，50ml，PH為7.2±0.2 ，白蓋。
5) 肺炎衣原體抗IgM酶標物：1瓶，20ml，內含過氧化物酶標記的兔抗人IgM，紅色黑蓋。即用。
6) TMB底物液，1 瓶，內含TMB，黃蓋，15ml，即用。
7) 肺炎衣原體IgM陽性質控，1 瓶 ，黃色液體，2ml，紅蓋
8) 肺炎衣原體IgM臨界質控，1 瓶 ，黃色液體，2ml，綠蓋
9) 肺炎衣原體IgM陰性質控，1 瓶 ，黃色液體，2ml，藍蓋
4.2 實驗所需材料和器材
1) 酶標儀，可在450/620測吸光度值
2) 37℃孵化器
3) 手工或自動微孔清理設備
4) 10μl和1000μl的取樣吸頭
5) 旋渦混合器
6) 去離子水或蒸餾水
7) 試管
8) 記時器
5．樣本貯藏和準備：
5.1用人血清做為樣本。如果檢測在樣品收集后24小時內進行，則樣品應當存放與2-8℃的環境下；否則應當將其貯存于-70℃—20℃的環境下。如果樣品被凍存過，則在檢測之前應小心解凍樣品，避免反復凍溶。
5.2樣品的稀釋
檢測前，所有的每樣品都應按1：100的比例當用IgM樣品稀釋液進行稀釋。在10μl樣品中加入1ml IgM樣品稀釋液，旋渦混合器上完全混合。陽性質控和陰性質控不需要稀釋，待用。
6．實驗步驟：
實驗開始之前仔細閱讀操作步驟，嚴格遵守操作步驟才可以獲得可靠的實驗結果。如果這實驗是在ELISA自動系統上進 行，為了避免洗板的影響，我建議在洗板步驟時，洗板3次改成洗板5次，洗滌液從300μl增加到350μl。實驗開始之前，應當在試劑盒提供的結果單上標 記好所有的樣品和質控品。取適當數量的板條置于板架上。
請至少做以下幾個孔：
1孔（例A1）做空白對照孔
1孔（例B1）做陰性質控
2孔（例C1+D1）做臨界質控
1孔（例E1）做陽性質控
如果有必要的話，我們建議您質控和病人樣品做雙份檢測。照說明書給出的實驗步驟進行操作，并避免不同步驟之間的時間隔無明顯差別。加每一質控品和樣品時都應當用新的取樣吸頭。把恒溫箱調至37 ± 1℃
1) 加100μl質控品或已稀釋樣本于相應反應孔中，留A1孔做空白。
2) 蓋板
3) 37℃±1℃下溫育60+5分鐘。
4) 溫育之后，移去粘性金屬板，棄去孔內反映液，用300μl洗滌液洗板3次，每次洗板循環間的時間間隔應大于5秒，并在吸水紙上拍干。
注意：洗板很重要，如果洗板不充分，則檢測結果會不精確，而且會錯誤的提高OD值。
5) 除空白孔外，加100μl 肺炎衣原體抗IgM酶標物于各孔中，蓋板。
6) 37℃±1℃下避光溫育30+2分鐘。。
7) 重復步驟4。
8) 每孔加100μl TMB底物液。
9) 室溫避光溫育30分鐘。
10) 以加底物一樣的順序和速度在每孔中加入100μl終止液。
11) 30分鐘內在450nm讀吸光度。
7．結果判定：
1）必須符合以下條件, 實驗結果才能成立.
空白孔A1：OD＜0.100
陰性質控孔B1：OD＜0.200
臨界質控孔C1和D1：OD值界于0.250---0.900
陽性質控孔E1：OD大于或等于臨界
2）結果計算：cut-off值是臨界質控檢測結果的平均值
例如：臨界質控OD值1.44+臨界質控OD值0.42=0.86/2=0.43
Cut-off值=0.43
3）結果解釋：
如果樣品的OD值比cut-off值高10%以上則認為此樣品呈陽性
如果樣品的OD值在比cut-off值高或低10%的范圍內，則認為次樣品是可疑的。（灰色區域）建議2-4周后用新鮮樣品重復檢測，如果結果仍位于灰色區域內，在認為此樣品為陰性。
如果OD值比cut-off值低10%以上則認為此樣品呈陰性。
4）實驗結果的單位
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= [Units = U] |
病人的（平均）OD值x 10
Cut-off值
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= 28 U ( Units) |
例如：1.204 x 10
0.43
臨界值：10U
灰色區域：9-11U
陰性：＜9 U
陽性：＞11 U
本譯文由廣州健侖生物科技有限公司編譯，僅供參考，請以原說明書為準或與我們公司工作人員聯系！
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